登陆流式细胞术是一种非常成熟的技术,在临床前和临床过程中有广泛的应用并发挥了非常重要的作用。流式细胞术的受体占有率(RO)分析是一种稳健的分析方法,旨在识别、量化和监测治疗药物与其靶点的结合。众所周知,在药物临床研究中,RO分析可辅助剂量设定、帮助评估生物制剂最小生物效应水平、最佳剂量并建立合理给药方案。RO分析可用于安全性评估,评估长期饱和RO导致的毒副作用的可能性。RO通常被视为药效学(PD)生物标志物数据,并与传统的药代动力学(PK)评估相结合,用于建模PK/PD关系,是作用于细胞表面靶点的大分子药物PK/PD建模的基石。
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对于受体占位研究,应用最多的研究样品是全血,因为其采集相对方便。临床前动物试验是分批操作,检测分析实验室一般与动物设施相邻比较近,检测方便,因而使用全血分析的情况更多。然而,在临床实践中,由于临床研究中心一般离分析实验室很远,甚至分布在全国各地,全血样本对分析的时效性提出了很高的要求,同时,因为每个分析批分析的样本数量较少,造成单个样本的分析成本很高,同时也造成实验资源的浪费。对于多数靶点,因为分离的PBMC在-80℃或者液氮中能够保存较长的时间,对靶点占位率影响很小,因而越来越受到欢迎。精翰生物流式项目团队,通过多个项目的经验积累,已经与多家临床研究中心(医院)合作,提供全血分离PBMC的整套解决方案,包括样品采集,PBMC分离试剂、耗材以及操作培训,PBMC冻存试剂、耗材以及操作培训,PBMC运输及注意事项等一整套解决方案。
随着项目的开展,尤其是II期,III期阶段,会有更多的临床研究中心(医院)加入临床研究。各临床中心实验室由于仪器配置(水平转头离心机),人员配置(需要有一定经验的工作人员)等限制,并非所有的临床中心都有能力开展PBMC的分离和冻存操作。临床研究中心强烈建议能够有一种更为简便的样本采集和处理流程,用于受体占位的分析。
基于此种情况,精翰生物流式项目团队,开发,优化,并验证了基于全血冻存样本的受体占位分析。在此过程中,精翰生物流式项目团队,测试了5种不同的全血冻存液,3种不同的全血抗凝剂,最终找到合适的全血冻存液和抗凝剂,目前项目已经完成全血试验方案与PBMC提取方案数据对比;全血样本-20℃冻存1天,冻存3天稳定性测试;全血样本-70℃冻存3天稳定性测试,冻存30天稳定性测试;结果显示,全血试验方案与PBMC提取方案数据一致;全血样本-20℃冻存1天,冻存3天,结果稳定,数据与未冻存全血和冻存PBMC结果一致;全血样本-70℃冻存3天,冻存30天,结果稳定,数据与未冻存全血和冻存PBMC结果一致。全血冻存细胞活力与冻存PBMC细胞活力具有可比性,完全满足受体占位分析的要求。
全血冻存与提取PBMC相比,具有非常大的优势,主要体现在两个方面。
1. 操作简便,无需特殊仪器设备和耗材,对临床中心要求很低,所有的临床中心都可以进行样本采集工作。临床中心只需要将受试者外周血采集到指定的抗凝管中,与一定比例的全血冻存液混合后,分装到细胞冻存管中即可。如果有-70℃冰箱,可以较长时间收集样本,然后批次寄送给分析检测实验室。如果只有-20℃冰箱,可以采集样本后暂时存储于-20℃冰箱,然后安排运输至分析检测实验室进行较长期的存储,批次进行分析。
2. 样本采集成本降低。由于不涉及PBMC分离操作,因此分析PBMC需要的Ficoll溶液,或者CPT单核细胞分离管,离心管,PBS洗涤液等试剂耗材均不再需要。更为重要的是,原来需要2-3小时进行的分离操作,现在只需要10分钟即可完成。所以,试剂耗材和时间成本都大大降低。
3. 更多可用的临床数据。在受体占位检测中,很多项目,受困于样本的采集,分离PBMC等操作,100位受试者参与的临床研究,可能只有40位受试者可以进行受体占位的分析检测,甚至更少。全血样本冻存进行受体占位分析的试验方案,可以让所有的临床受试者的样品均得到分析,最大程度的利用临床试验数据,且能节省成本,提高临床中心的效率。
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